Cortes a mano alzada

1. De acuerdo a las estructuras que se desean ver se realiza un corte transversal o longitudinal, hoja, tallo o raíz de la planta. El corte se realiza manualmente con ayuda de un estereoscopio con una cuchilla minora.

2. Se realizan varios cortes del mismo tejido y se colocan en un porta-objeto.

3. Para poder ver las diferentes estructuras del corte se hace una tinción ya sea con safranina o con fast green.

4. Para las dos se realiza el mismo proceso: después de tener el corte se agrega menos de una gota del reactivo, se espera durante 90 seg, se agrega unas pocas gotas de agua para quitar el exceso de reactivo, y se agrega menos de una gota de glicerina y el exceso es removido con papel, por ultimo se cubre el tejido con una laminilla.5. Se procede a ver el corte en el microscopio, reconociendo las estructuras.

Trabajo Con Microtomo

1. Realizar cortes de tallo, hoja raiz.

2. Los cortes tienen que ser fijados con solucion FAA para preservar las estructuras
Alcohol etilico al 70% (90 cm3)
Acido acetico glacial (5 cm3)
Formol 37-40% (5cm3) El tiempo de fijacion es de 24 horas

3. Lavado de los tejidos en alcohol al 50% para neutralizar

4. Se toma la meustra y se lleva a cassette de inclusion

5. Todos los cortes se depositan en un frasco lo suficientemente grande para que queden flotando

6. Se lleva a cabo el proceso de deshidratacion de los tejidos con alcoholes ascendentes
50% (durante 12 h) 70% (durante 12 h) 80% (durante 12 h) 95% (durante 12 h)

7. Se lleva a cabo el proceso de aclaramiento.

Mezcla de alcohol etilico 95% (3/4) y terbutanol (1/4) durante 6 h. Segunda mezcla de alcohol etilico 95% (2/4) y terbutanol (1/2) durante 6 h. Tercera mezcla de alcohol etilico al 95% (1/4) y terbutanol (3/4) durante 12 h. Terbutanol durante 12 h.

8. Se lleva a cabo el proceso con parafina
Mezcla de parafina liquida a 56ºC (1/2) y terbutanol (1/2) durante 6 h.
Mezcla de parafina pura (1/2) y terbutanol (1/2) durante 6h.
Parafina pura a 56ºC durante 6h.

9. Proceso de inclusion del tejido en parafina. Verter en el molde.

10. El portaobejeto se pone en incubadora con corte de microtomo durante 12h.

11. Para desparafinizar se vierte el portaobjeto en xilol durante 1/2 hora.

12. Se le quita el exceso de alcohol con alcoholes descendentes

98%, 80%, 70%, 60%; sumergiendo el portaobjeto en cada alcohol.

13. se lava con agua de grifo

14. Los cortes se depositan en safranina durante 24 horas.

15. Se lava con agua de grifo

16. Se ponen en Alcohol con HCl que decolora
Alcohol con 2 o 3 gotas de clavo y Xilol
Alcohol al 95% y se contrasta con fast green durante 1/2 min.

17. Se agregan a una solucion de esencia de clavo y Xilol
Solución de esencia de clavo y etilil glicerol
Solución alcohol etilico al 95% y Xilol
Xilol

18. Gota de resina

19. Se cubre con una laminilla

20. Esta listo para ser observado al microscopio

Casificación Taxonómica

Reino: Plantae
División: Magnoliophyta
Clase: Magnoliopsida
Orden: Asterales
Familia: Asteraceae
Subfamilia: Asteroideae
Tribu: Calenduleae
Género: Calendula

Tejido Protector

En este corte, con tinción de safranina, se puede ver claramente toda la corriente citoplasmática de la célula epidérmica de Calendula. Vemos que la parte superficial de la célula es aplanada y hacia adentro de forma rectangular irregular.

En este corte transversal con tinción de safranina se pueden apreciar los estomas los cuales son comunican las partes profundas del tallo y de las hojas con el ambiente. En este corte se puede apreciar los estomas de tipo tetracítico con células anexas grandes y disparejas, con formas muy irregulares. Posee 4 células subsidiarias.
Los estomas se pudieron ver en el mismo corte de epidermis, no fue necesario hacer otro corte, pues había partes del corte más gruesas donde se encontraban los estomas.

Tejido Vasculares

En este grafico se puede evidenciar que hay una formación de células alargas que son tejido de protección y sostén que es el esclerénquima pero aunque en la foto no se nota a gran claridad ahí es donde se encuentran los sistemas vasculares de la planta que los divide un pared muy delgada; en este corte no se puede observar bien la parte la epidermis porque esta muy enfocado; estas células se ubican en seguida de los principales tejidos de conducción como son el xilema el cual transporta agua y sustancias disueltas, allí donde se encuentra el señalador, es donde con un mejor aumento se notaban los tubos cribosos; y el floema que transporta azucares y otros nutrientes sintetizados.

En el colénquima y en las células parenquimatosas típicas, debemos tener en cuenta la morfología y las caras de las células porque podemos confundirlas con las del colénquima ya que estas sí tienen una forma definida y se ven como en 3d.

Tejido Parenquimático

Acá se puede ver el corte transversal de hoja de caléndula teñido con fast-green. Es posible observar la epidermis y el parénquima. Las células epidérmicas se observan en una forma ovalada que están adyacentes y es la capa más externa del corte. Después de la epidermis vienen una serie de células que presentan formas irregulares las cuales son de mayor tamaño a las epidérmicas, y lo más probable es que estas formen el parénquima empalizada ya que están adyacentes a la epidermis y están llenas de cloroplastos. Finalmente se observan una serie de células las cuales tienen una forma redondeada y que están teñidas únicamente en sus paredes debido a que presentan un espacio intracelular grande. Estas células forman el parénquima lagunar o esponjoso; y como su nombre lo indica se observan como con formas de lagunas. Presenta menor cantidad de cloroplastos que las células del parénquima de empalizada.

Al parénquima de empalizada y al parénquima lagunar también se les conoce como parénquima clorofíliano ya que es tejido que realiza la fijación del carbono la mediante fotosíntesis en hojas y tallos verdes. El parénquima empalizada es el principal tejido que realiza fotosíntesis y por lo tanto proporciona alimento a la planta. El parénquima lagunar posee espacios intracelulares amplios lo que le permite hacer intercambio gaseoso. Posee una menor cantidad de cloroplastos porque aunque lleva a cabo fotosíntesis, su función principal es el intercambio gaseoso.

Si comparamos lo que se observa en el dibujo con lo que dice la teoría es posible destacar una diferencia principal y es el hecho de que no se ve claramente la diferenciación celular. Además de esto, las células del parénquima empalizada no muestran la forma típica alargada que se muestra en la teoría, pero es posible decir que son células parenquimatosas debido a la gran presencia de cloroplastos.

Tejido Meristemático

En estos dibujos histológicos podemos observar como las células meristemáticas de una raíz secundaria tienen una forma hexagonal, que se disponen como un panal, con la pared celular delgada, con núcleos muy grandes, lo cual nos indica que es una célula meristemática ya que no esta diferenciada, las células se ven de color rojo por el colorante que nos ayuda principalmente a teñir el núcleo, el cual se ve oscuro y nítido en el interior de la célula. También podemos observar la formación de rayos floemáticos, que se ven como líneas oscuras dirigidas hacia el interior del meristemo. A 40x podemos observar muy claramente estas células, a diferencia de 10x que muestra la estructura completa de raíz desde su parte más externa hasta la más interna, mostrando diferencias estructurales en las células presentes en el tallo.